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POBLACION Y PROCEDIMIENTOS
Población
Se estudiarán 88 niños de una comunidad Toba en el departamento General San Martín de la provincia de Chaco, 45 niñas y 43 niños, sus edades comprenden desde los 2 meses a los 16 años con una media de 9 años. Las medidas antropométricas serán peso y talla, para el análisis nutricional se utilizarán los Estándares Nacionales de Crecimiento y Desarrollo, como así también los Estándares Internacionales de IMC para niños y adolescentes.
Se recogerán 88 muestras de sangre con lancetas (BD) del pulpejo del dedo en tubos con gel separador de suero las cuales serán centrifugadas en microcentrifuga a una velocidad de 13000 g y guardadas a 4º hasta su uso, de la misma manera se tomará una gota del pulpejo, colocándola en papel nucleico (Biodynamics) con la correspondiente identificación; se dejará el papel a temperatura ambiente hasta su procesamiento. Cabe aclarar que el material será recolectado en terreno, previo consentimiento informado del o los apoderados y/o padres de los niños.
Técnicas serológicas Para los ensayos serológicos se utilizarán dos técnicas: hemoaglutinación indirecta (HAI, Chagas® Wiener.) y enzimoinmunoensayo (ELISA Biomerieux ). Con ambos Kits se procederá según inserto. Extracción de ADN desde papel nucleico Piezas de 2mm de diámetro serán extraídas desde la gota seca de sangre de cada papel nucleico las cuales se procesarán de la siguiente manera: la pieza se coloca en un tubo eppendorf de 500 ul al cual se agrega 40 ul de NaOH 0.04M, se lleva a punto de ebullición por 30 minutos y luego se neutraliza con Tris-Clorhídrico 0.05 mM ph 7,5.
Una alícuota de 10 ul se usa de templado para PCR PCR Amplification Para realizar la PCR se utilizará un par de oligonucleótidos sintéticos TCZ 1 (CGAGCTCTTGCCCACACGGGTGCT) y TCZ 2 (CCTCCAAGCAGCGGATAGTTCAG) dirigidos hacia una región repetitiva nuclear del DNA del T Cruzi, que amplifican un segmento de 188 pb. Se incluyen controles negativos y positivos que son procesados en paralelo junto con las muestras por duplicado de los pacientes.
Se corre a su vez un blanco de reacción incluyendo agua libre de nucleasas como templado. Los productos de PCR se visualizan por electroforesis en gel de poliacrilamida al 8%, teñidos con plata.
Impacto que se logró o espera lograr en la calidad de vida de las personas excluidas:
Se logró la construcción de un aula y adquisición de una heladera mejorando las condiciones de habitabilidad de la Escuela Rural que funciona como único polo sanitario de la comunidad. Se estimuló la realización de artesanías en paja, una de las formas de sustento comunitarias. Además se ha logrado suministro de alimentos, ropas y medicamentos recolectados por los miembros del grupo que son distribuidos por el enfermero (origen Toba) del puesto sanitario.
Aspectos innovadores o replicables de la experiencia:
Implementación de una técnica de biología molecular para detección temprana de infección chagásica, utilizando mínimas cantidades de muestra sanguínea (una gota).
Principales obstáculos o desafíos que presenta la práctica:
· Distancia del terreno de estudio.
· Dificultades económicas para traslados del equipo, reactivos (lancetas, papel nucleico, reactivos para PCR, kits para serología, etc).
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Dificultad para lograr el tratamiento y seguimiento necesario de la población estudiada.
¿En el caso de resultar premiada la práctica postulada, en qué invertirá el premio?
El premio se distribuiría en parte para la continuidad del proyecto científico, y también para cubrir necesidades básicas de la Escuela-Polo sanitario